Ускоренный способ идентификации возбудителей бактериемий с применением метода газовой хромато-масс-спектрометрии

Тип работы:
Реферат
Предмет:
Медицина
Узнать стоимость новой

Детальная информация о работе

Выдержка из работы

стику инфекций, вызываемых ВЛЗН и ВКЭ.
ЛИТЕРАТУРА
1. Антонов В. А., Смоленский В. Ю., Путинцева Е. В. и др. Проблемы особо опасных инфекций. 2012- 1: 17−21.
2. МосквитинаН.С., Романенко В. Н., Терновой В. А. и др. Паразитология. 2008- 3(42): 210−25.
3. МУ 1.3. 2569−09. Организация работы лабораторий, использующих методы амплификации нуклеиновых кислот при работе с материалом, содержащим микроорганизмы I-IV групп патоген-ности. М.: Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека- 2009.
4. МУ 3.1.3. 2600−106. Мероприятия по борьбе с лихорадкой Западного Нила на территории Российской Федерации. М.: Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека- 2010.
5. Путинцева Е. В., Липницкий А. В., Алексеев В. В. и др. Проблемы
особо опасных инфекций. 2011- 1: 38−42.
6. Онищенко Г. Г., ред. Сборник материалов по вспышке лихорадки Западного Нила в Российской Федерации в 2010 г. Волгоград: Волга-Паблишер- 2011.
7. Guerrero-Sanchez S., Cuevas-Romero S., Nemeth N.M. et al. J. Emerg. Infect. Dis. 2011- 12(17): 2245−52.
8. Hogrefe W.R., Moore R., Lape-Nixon M. et al. J. Clin. Microbiol. 2004- 10(42): 4641−8.
9. HolbrookM.R., Shope R.E., Barret A.D.T. J. Clin. Microbiol. 2004- 9(42): 4106−10.
10. MartinD.A., BiggerstafB.J., AllenB. et al. Clin. Diagn. Lab. Immunol. 2002- 3(9): 544−9.
11. Martin D.A., Noga A., Kosoy O. et al. Clin. Diagn. Lab. Immunol. 2004- 6(11): 1130−3.
12. Larsen J., Sch0nheyderH.C., SinghK.V. et al. J. Emerg. Infect. Dis. 2011- 12(17): 2397−9.
Поступила 04. 07. 12
© КОЛЛЕКТИВ АВТОРОВ, 2013 УДК 616. 157−078:543. 544. 45. 08
Д. А. Попов, С. Т. Овсеенко, Г. А. Осипов, Т.Ю. Вострикова
ускоренный способ идентификации возбудителей бактериемий с применением метода газовой хромато-масс-спектрометрии
НЦ ССх им. А. Н. Бакулева РАмН, москва, Россия
Проведена сравнительная оценка эффективности родовой идентификации гемокультур методом газовой хромато-масс-спектрометрии (ГХ-МС) путем сопоставления с данными традиционного культурального метода. Содержимое флаконов с положительной гемокультурой анализировали традиционными микробиологическими методами и методом ГХ-МС с детекцией маркеров наиболее распространенных возбудителей нозокомиальных бактериемий: микроорганизмов родов Staphylococcus, Enterococcus, Klebsiella, Escherichia, Serratia, Pseudomonas, Acinetobacter, Stenotrophomonas, Candida. Определена возможность применения метода ГХ-МС для родовой экспресс-идентификации возбудителей бактериемий. Выявлено полное совпадение результатов, полученных методом ГХ-МС, с данными классического бактериологического метода. Показано сокращение времени анализа при родовой идентификации гемокультур методом ГХ-МС до 3 и менее против 1,5−2 сут при традиционном подходе, что может способствовать более раннему началу этиотропной терапии при тяжелых инфекциях.
Ключевые слова: бактериемия, нозокомиальные инфекции, газовая хромато-масс-спектрометрия D.A. Popov, S.T. Ovseyenko, G.A. Osipov, T. Yu. Vostrikova
THE EXPRESS MODE OF IDENTIFICATION OF AGENTS OF BACTEREMIAS USING THE TECHNIQUE OF GAS CHROMATOGRAPHY-MASS SPECTROMETRY
The A.N. Bakulev National center of cardio-vascular surgery of the Russian academy of medical sciences, Moscow, Russia
The comparative evaluation was carried out concerning the effectiveness of generic identification of hemocultures using the technique of gas chromatography-mass. spectrometry by comparison with data of common cultural method. The content of vials with positive hemoculture was analyzed using both the common microbiologic methods and the technique of gas chromatography-mass spectrometry with detection of markers of the most widespread agents of nosocomial bacteriemias: microorganisms ofgenus Staphylococcus, Enterococcus, Klebsiella, Escherichia, Serratia, Pseudomonas, Acinetobacter, Stenotrophomonas, Candida. The possibility of applying the technique of gas chromatography-mass spectrometry for generic express-identification of agents of bacteriemias was established. The full concurrence of results obtained by gas chromatography-mass spectrometry with the results of common bacteriologic method was revealed. The time saving of analysis during generic identification of hemocultures using gas chromatography-mass spectrometry up to three and less hours against 1. 5−2 days in case of common approach. The established information can input into earlier start of etiotropic therapy under severe infections.
Key words: bactriemia, nosocomial infection, gas chromatography-mass spectrometry
Для корреспонденции:
Попов Дмитрий Александрович, канд. мед. наук, рук. лаб. клин. микробиологии и антимикробной терапии Адрес: 121 552, Москва, Рублевское ш., 135 Телефон: (495) 414−79−14 E-mail: DAPopov@heart-house. ru
Введение. Несмотря на использование современных методов лечения, проблема инфекционных осложнений у больных, находящихся в отделениях интенсивной терапии, остается актуальной. Задержка с назначением антимикробных препаратов при тяжелых инфекциях неизбежно приводит к прогрессиро-
микробиология
ванию заболевания вплоть до развития септического шока и полиорганной недостаточности, что отрицательно влияет на результаты лечения [8, 10]. При этом каждый час промедления свыше 6-часового терапевтического окна снижает вероятность благоприятного исхода при септическом шоке на 7,6% [7].
Методы классической микробиологии, подразумевающие культивирование микроорганизмов с последующей их идентификацией по культуральным, морфологическим, тинктариальным, биохимическим, антигенным признакам, занимают лидирующее место по использованию в клинической практике. Существенным недостатком данных методов является длительное время до получения результата (обычно не менее 18−24 ч), что обусловлено физиологией микроорганизмов, требующих времени для своего роста. Отрицательный результат посева крови обычно выдается лишь через 5−7 сут, что в ряде случаев является критичным.
С целью сокращения времени идентификации возбудителей бактериемии применяются методы молекулярной диагностики, основанные на принципе полимеразной цепной реакции (ПЦР) — за первичным посевом гемокультуры следует выделение ДНК, ее амплификация, затем детекция продуктов ПЦР, в частности, методом микрочипов [13]. Данные методы позволяют значительно сократить временной интервал между взятием образца крови больного и определением вида возбудителя, при этом спектр детектируемых возбудителей охватывает порядка 90% клинически значимых микроорганизмов. Различные модификации метода отличаются друг от друга спектром определяемых патогенов, временем до получения результата (в среднем от 6 ч до 1 сут), методами детекции продуктов ПЦР и соответственно набором необходимого оборудования.
Особое место занимает метод мультиплексного ПЦР-анализа в режиме реального времени, минуя стадию первичного посева гемокультуры с идентификацией продуктов, с использованием в качестве субстрата цельной крови пациента с подозрением на бактериемию [14]. Этот метод был апробирован для диагностики бактериемий у кардиохирургических больных [5], при этом время анализа от взятия пробы крови у пациента составляло около 8 ч.
К недостаткам технологий на основе ПЦР следует отнести ограниченный перечень идентифицируемых патогенов, риск контаминации образцов во время пробоподготовки, ведущий к получению ложнопо-ложительных результатов, необходимость наличия сложного и дорогостоящего оборудования. В связи с тем что ПЦР может быть ингибирована гепарином, существуют серьезные ограничения по применению методов на ее основе у больных, получающих данный препарат, рутинно используемый в интенсивной терапии [3].
В последнее время в практику начинают внедряться физико-химические методы идентификации микроорганизмов, обладающие превосходными временными характеристиками и высокой специфичностью. Так, метод матричной лазерной десорбционной ионизационной времяпролетной масс-спектрометрии (МАЬО!-ТОР MS) позволяет
сокращать время идентификации чистых культур до нескольких минут [12].
Одним из способов идентификации микроорганизмов является метод газовой хроматографии (ГХ). Он основан на качественном и количественном определении жирных кислот и альдегидов, а также их производных, входящих в состав клеточных стенок бактерий. Первоначально этот метод применялся для изучения микробных сообществ в экологии и биотехнологии [6]. Серии работ посвящены хемодифференциации клинически важных микроорганизмов как методом ГХ, так и его комбинацией с масс-спектрометрией — ГХ-МС [1, 9]. Разработана и широко используется коммерческая система для рутинного бактериологического анализа [11]. Параллельно метод ГХ-МС нашел применение в медицине для анализа состава микробных сообществ организма человека [4]. В его клиническом варианте присутствие тех или иных возбудителей выявляется благодаря математической реконструкции микробного сообщества по микробным маркерам и профилям в рамках технологии масс-спектрометрии микробных маркеров (МСММ) [2]. В упрощенном варианте, например при анализе клинических изолятов, в которых обычно присутствуют один — два вида микроорганизмов, эти маркеры могут быть использованы для их идентификации, минуя алгоритм МСММ. Метод экономичен и не требует дорогостоящих расходных материалов.
Цель настоящей работы — оценить эффективность родовой идентификации гемокультур с применением метода ГХ-МС в сравнении с традиционными культу-ральными методами.
Материалы и методы. В проспективное исследование включены 93 гемокультуры, полученные от 84 взрослых кардиохирургических пациентов с подозрением на бактериемию в раннем послеоперационном периоде, находящихся в отделении реанимации и интенсивной терапии. Работа выполнялась с использованием образцов, направляемых в лабораторию по рутинным назначениям лечащих врачей, и не предполагала дополнительных интервенционных вмешательств.
Для исследования на стерильность образцы крови объемом 5−10 мл, взятые из периферической вены, помещали в стандартные аэробные флаконы с обогащенной питательной средой, содержащие сорбенты для антибиотиков (активированный уголь). Инкубация гемокультур осуществлялась с помощью прибора BACTAlert 3D (Biomerieux, Франция). При выявлении роста микроорганизмов проводили высев содержимого флакона на плотные питательные среды с последующей идентификацией и исследованием чувствительности к антибиотикам с помощью автоматического анализатора Vitek 2 compact (Biomerieux, Франция). Параллельно с традиционными методами содержимое & quot-проросших"- флаконов исследовано методом ГХ-МС. Для контроля были взяты 9 отрицательных гемокультур.
Для определения маркеров микроорганизмов методом ГХ-МС образец жидкой питательной среды из «проросшего» флакона в объеме 1,5 мл центрифугировали при 4000 об/мин в течение 10 мин, осадок, содержащий клетки микроорганизмов, высушивали и
химические маркеры микроорганизмов
подвергали кислому метанолизу в 1,2N HCl в метаноле (1 ч, 80оС). Далее реакционную смесь дважды экстрагировали н-гексаном, объединенный экстракт высушивали, после чего обрабатывали 20 мкл П, 0-бис (триметилсилил) трифторацетамида и выдерживали при 80оС в течение 15 мин. Полученный триметилсилил-замещенный продукт растворяли в 80 мкл н-гексана и исследовали методом ГХ-МС в режиме полного сканирования с использованием газового хроматографа Agilent Technologies 6890, оснащенного масс-спектрометрическим детектором Agilent Technologies 5973. Хроматорафическое разделение компонентовпроисходилонаквар-цевой капиллярной колонке HP5 диаметром 0,2 мм, длиной 25 м, с толщиной слоя 0,33 мкм. Газ-носитель гелий, скорость потока 24 мл/мин, скорость потока через колонку 1,2 мл/мин. Температурный режим во время анализа: температура испарителя 280оС, начальная температура термостата колонки 80оС, время выдержки 4 мин, далее нагрев до 240оС со скоростью 7оС/мин, до 320оС со скоростью 15оС/мин, затем термостатирование при 320оС до конца анализа. Объем анализируемой пробы 1,5 мл, общее время анализа 35 мин, время задержки работы детектора 4 мин.
Обработка хроматограммы производилась следующим образом: находился пик триметилсилильно-го производного стандарта — C13CD3 кислоты, время выхода (RT) = 8,39, определялась его площадь, затем находился пик i-го компонента смеси по пику основного иона, подтвержденному пиком дополнительного иона с тем же временем удерживания, определялась его площадь (по основному иону). Количественный расчет содержания i-го компонента производился по формуле:
S • m
с =--ц-,
i SST • M • V
ST rst s
где ci — концентрация i-го компонента (в нг/мл), mst — масса вводимого стандарта (300 нг), Sst — площадь пика стандарта, Мг — молекулярная масса стандарта (231,3), Vs — объем собразца (1,5 мл).
Интерпретация результатов исследования методом ГХ-МС производилась с использованием данных соответствия маркерных веществ клинически значимым микроорганизмам (табл. 1) [1, 4].
Данные представлены в виде медианы и интер-квартильного размаха.
Результаты и обсуждение. Традиционным бактериологическим методом в исследованных 93 гемо-культурах было выделено 14 видов микроорганизмов, в том числе 4 — в ассоциации (табл. 2).
В ходе исследования методом ГХ-МС выявлено значительное (в десятки-сотни раз) превыше-
Таблица 1
Род микроорганизмов Химическое название кислоты (маркера) Сокращенное обозначение
Staphylococcus Изо-и антеизопентадекановая, изо-и антеизогептаде-кановая, антеизононадекановая i15, a15- i17, a17, a19
Acinetobacter 3-Гидрокси- и 2-гидроксидодекановая 3h12 и2h12
Klebsiella А-Цис-9,10-метиленгексадекановая и 3-гидрокситетрадекановая 17cyc, 3h14 и 2h14
Candida Гептадеценовая 17: 1
Enterococcus А-Цис-11,12-метиленоктадекановая, циклононадекано-вый альдегид 19cyc, 19 cyc a
Serratia 3-Гидрокситетрадекановая, А-цис-9,10-метиленгексадекановая, 2-окситетрадекановая, А-цис-11,12-метиленоктадекановая 3h14, 2h14 17cyc, 19cyc
Pseudomonas 2-Гидрокси- и 3-гидроксидодекановая А-цис-9,10-метиленгексадекановая 2h12, 3h12, 17cyc
Esсheriсhia 3-Гидрокситетрадекановая, А-цис-9,10-метиленексадекановая 2-Окситетрадекановая, А-11,12-метиленоктадекановая 3h14, 17cyc 2h14, 19cyc
Stenotrophomonas maltophilia Изо-3-гидрокситридекановая и 2-гидроксидодекановая 3hi13, 3h12
ние интенсивностей сигналов микробных маркеров по сравнению с их фоновой концентрацией в отрицательной гемокультуре (табл. 3). Так, медианы концентраций 3-гидроксидодекановой (3Ы2) и 2-гидроксидодекановой (2Ы2) кислот, специфичных для ацинетобактера, в соответствующих образцах составляли 334,1 и 465,3 мкг/мл, тогда как в отрицательной гемокультуре (п = 9) эти значения равны соответственно 1,1 и 0 мкг/мл. Медианы метиленгекса-
видовой состав исследованных гемокультур (n ¦
Таблица 2 = 93)
Вид микроорганизмов Абс. %
A. baumannii 16 17,2
S. haemolyticus 16 17,2
K. pneumoniae 14 15,1
C. parapsilosis 10 10,8
S. epidermidis 9 9,7
S. aureus 6 6,5
E. faecium 5 5,4
E. faecalis 4 4,3
S. hominis 3 3,2
P. aeruginosa 2 2,2
E. coli 1
S. maltophilia 1
S. marcescens 1
C. albicans 1
A. baumannii + E. faecium 1
K. pneumoniae + S. epidermidis 1
K. pneumoniae + P. aeruginosa 1
K. pneumoniae + A. baumannii 1
микробиология
Таблица 3
Содержание микробных маркеров в исследуемых образцах (медиана, интерквартильный размах, мкг/мл)
Статистический показатель 3h12 2h12 i15 a15 3hi13 16: 1d7 3h14 2h14 i17 a17 17: 1d9 17cyc a19 19cyc
Роста нет
Ме 1,1 0 35,8 57,9 0 39,8 5 2,3 236,9 142,7 10,3 0 16,6 0
25th 0 0 19,3 18,6 0 20,5 1,9 1,3 165,5 86,4 5,6 0 6,4 0
75 th 4,2 0,7 51,9 80,6 0 59,3 5,9 2,8 320,9 177,4 22,7 0 21,4 0
Acinetobacter
Ме 334,1 465,3 20,6 28,4 0 63,1 37,8 2,1 86,4 42,8 13,8 0 8,8 0,8
25th 98,2 135,8 9,2 12,4 0 37,7 11,7 1,2 26,9 16,3 6,1 0 3,1 0
75 th 425,1 656,7 159,1 479,7 0 115,3 108,9 7,2 280,6 232,1 26 0 34 1,4
Klebsiella
Ме 14,3 19,6 25,1 35.6 0 86,1 1319,2 145 120,8 85,4 16,5 1445 15,1 754,3
25th 7,8 5,8 20,3 30,3 0 68,6 556,2 36,4 69,5 48,7 11,1 451.9 6,5 372,6
75 th 42,2 154,4 40,4 47,8 0 116,5 2939,3 371,3 215,2 119,2 38,3 2153,1 18,7 1198,5
Pseudomonas aeruginosa
Ме 124,7 2238 25,3 33,6 0 78,2 6 4,5 183,3 117,3 18,5 80,5 10,3 356,3
25th 67,7 1309 20 28,4 0 45,1 4,3 0 138,1 56,6 16,5 68,5 6,3 175
75 th 865,8 2597 39 40,4 1,4 118,3 924,6 7 213,9 124,3 22,5 881,9 14,2 612,1
Staphylococcus aureus
Ме 0,7 0 5595,2 19 274 0 88,1 4,3 2,8 2178,5 4249,1 14,8 0 1584,6 0
25th 0 0 3835,4 16 901,3 0 53,6 2,5 2 1643,6 3213 13 0 1260,3 0
75 th 1,7 0 6826,6 26 263,4 0 158,7 13,9 3,8 2907 5082,9 26,8 0 2316,6 0
Staphylococcus CoN
Ме 1,2 0 2735,3 8479 0,3 65,7 8 2,1 1095,7 1872,3 14.6 0 600,7 0
25th 0 0 1343,9 4574.3 0 36,8 2,6 1,1 844,2 1123 7,5 0 364 0
75 th 4,7 0,3 4267,1 12 798,6 0 94,2 13,4 3,5 2166,8 3342,3 21,1 0 1169,6 1,5
Enterococcus
Ме 1,2 0,1 48 65,4 0 50,5 11,9 2,8 158,9 108,4 12 40,1 14,2 358,3
25th 0,7 0 30,1 57,4 0 34 8,2 1,4 54,9 39,6 10,5 15,9 9,3 201,6
75 th 19,1 0,6 176,4 91 2,3 76 22,2 3,8 363,5 185,6 16,2 92,2 21,8 604,4
candida
Ме 2 1 24,1 62,9 0 91 4,1 2,8 130,3 78,4 32,7 0 14,1 0
25th 1,1 0 13,5 17,9 0 51,9 3,8 1,5 59,8 67,7 18,2 0 11,6 0
75 th 3,8 2,2 62,2 129,1 0 101,9 21,1 3,7 180,6 101 47,7 0 22,9 2,3
Примечание. Жирным шрифтом выделены маркерные вещества, специфичные для микроорганизмов соответствующих родов.
декановой (17сус) и Р-гидроксимиристиновой (3Ы4) кислот, которые в паре друг с другом специфичны для клебсиеллы — 1445 и 1319,2 мкг/мл, в контрольных образцах 0 и 5 мкг/мл. Сходная картина наблюдалась для синегнойной палочки — в этом случае пару кислот, присущих ацинетобактеру (3Ы2 и 2Ы2), с медианами 124,7 и 2238 мкг/мл дополняет еще один маркер — 17сус (80,5 мкг/мл). Следует отметить, что соотношение изомеров 2Ы2: 3Ы2 (медианы) составляло порядка 1,4:1 в случае ацинетобактера и 17,9:1 для синегнойной палочки. Концентрация маркера энтерококка — 11,12-метиленоктадекановой кислоты (19сус) достигала в соответствующих пробах 358,3 мкг/мл против 0 мкг/ мл в отрицательной гемокультуре. Избыток изо-3-
гидрокситридекановой кислоты (3hi13) в количестве, равном 257,2 мкг/мл, и 2-гидроксидодекановой кислоты (146,3 мкг/мл) был выявлен в пробах, соответствующих Stenotrophomonas. В образцах гемокультур Serratia был выявлен набор маркеров, специфичных для данного рода: 3- и 2-гидрокситетрадекановые кислоты (3h14 — 1875,5 мкг/мл и 2h14 — 675,9 мкг/мл) вместе с 9,10-метиленгексадекановой (17cyc — 2512,5 мкг/мл) и 11,12-метиленоктадекановой кислотами (19cyc — 1097,7 мкг/мл). Для стафилококков характерна комбинация изомерных пар: изо- и антеизопента-декановые (i15 и a15), изо- и антеизогептадекановые (i17 и a17), изо- и антеизононадекановые кислоты — i19 и a19. Маркером грибов рода Candida является
гептадеценовая кислота (17: 1d9), уровень которой в соответствующих пробах составлял 32,7 мкг/мл по сравнению с 10,3 мкг/мл в отрицательной гемокультуре.
Метод ГХ-МС позволяет проводить родовую идентификацию как монокультур, так и ассоциаций: так, в четырех исследованных образцах одновременно определялись маркеры нескольких микроорганизмов (Acinetobacter spp. + Enterococcus spp., Klebsiella spp. + Staphylococcus spp., Klebsiella spp. + Pseudomonas spp., Klebsiella spp. + Acinetobacter spp.), что совпало с данными, полученными бактериологическим методом. Данные пробы содержали набор маркеров, специфичных для микроорганизмов, входящих в ассоциацию.
Анализ и обобщение полученных результатов показали совпадение данных метода ГХ-МС с данными бактериологического метода. При идентификации гемокультур методом ГХ-МС результаты получены в среднем через 3 ч после начала анализа, тогда как при проведении традиционного микробиологического исследования — через 1,5−2 сут.
На настоящем этапе метод ГХ-МС позволяет проводить только родовую идентификацию возбудителей бактериемий. Тем не менее в ряде случаев этого бывает достаточно для назначения адекватной антибио-тикотерапии. Однако имеются потенциальные возможности в некоторых случаях провести и видовую идентификацию. После набора статистических данных, возможно, удастся идентифицировать виды стафилококков и клебсиелл, а также расширить родовой список определяемых микроорганизмов.
Заключение. Метод ГХ-МС дает возможность существенно ускорить родовую идентификацию микроорганизмов в положительной гемокультуре, что является важным моментом для оптимизации эмпирического назначения антибиотиков. Однако это не снижает ценность методов традиционной бактериологии, так как на сегодняшний день только с их помощью возможно получение данных о чувствительности выделенных микроорганизмов к антимикробным препаратам.
ЛИТЕРАТУРА
1. Вейант Р., Мосс У., Холлис Д., Джордан Дж., Кук Э., Дейншвар М. Определитель нетривиальных патогенных грамотрицатель-ных бактерий. М.: Мир- 1999: 612−783.
2. Годков М. А., Осипов Г. А., ФедосоваН.Ф., Лядов К. В. Возможности масс-спектрометрии микробных маркеров в лабораторном мониторинге дисбиозов и инфекций. Справочник заведующего КДЛ. 2011- 7: 35−44.
3. Костюк С. А., Кулага О. К., Хворик Д. Ф. Новые аспекты клинического применения полимеразной цепной реакции. Медицинские новости. 2006- 5: 14−8.
4. Осипов Г. А. Хромато-масс-спектрометрическое исследование микроорганизмов и их сообществ: Дис. … д-ра биол. наук. М.- 1995.
5. Попов Д. А., Вострикова Т. Ю. Первый опыт применения метода ПЦР в режиме реального времени для диагностики бактериемии в послеоперационном периоде у кардиохирургических больных. Клиническая лабораторная диагностика. 2011- 8: 49−52.
6. Goodfellow M., Minnikin D.E., eds. Chemical methods in bacterial systematics. — New York- London- 1985.
7. Kumar A., RobertsD., WoodK.E., LightB., Parrillo J.E., SharmaS. et al. Duration of hypotension before initiation of effective antimicrobial therapy is the critical determinant of survival in human septic shock. Crit. Care Med. 2006- 34(6): 1589−96.
8. Levy M.M., Macias W.L., Vincent J.L. et al. Early changes in organ function predict eventual survival in severe sepsis. Crit. Care Med. 2005- 33: 2194−201.
9. Moss C.W., DeesS.R. Identification of microorganisms by gas chromatographic — mass spectrometric analysis of cellular fatty acids. J. Chromatogr. 1985- 12: 595−604.
10. Rivers E., Nguyen B., HavstadS. et al. Early goal-directed therapy in the treatment of severe sepsis and septic shock. N. Engl. J. Med. 2001- 345: 1368−77.
11. «Sherlock», Microbial identification system. Database on microbial cellular fatty acids. Delavare: MIDI Inc.- 1994.
12. Schmidt V., Jarosch A., Marz P., Sander C., Vacata V., Kalka-Moll W. Rapid identification of bacteria in positive blood culture by matrixassisted laser desorption ionization time-of-flight mass spectrometry. Eur. J. Clin. Microbiol. Infect. Dis. 2012- 31(3): 311−7.
13. Tissari P., Zumla A., Tarkka E., Mero S., Savolainen L., VaaraM. et al. Accurate and rapid identification of bacterial species from positive blood cultures with a DNA-based microarray platform: an observational study. Lancet. 2010- 375 (9710): 224−30.
14. Wallet F., Nseir S., Baumann L., Herwegh S., SendidB., Boulo M. et al. Preliminary clinical study using a multiplex real-time PCR test for the detection of bacterial and fungal DNA directly in blood. Clin. Microbiol. Infect. 2010- 16(6): 774−9.
Поступила 08. 11. 12
= Вниманию авторов! =
| С 1 апреля 2013 г. начилась подписка на журнал |
= «Клиническая лабораторная диагностика» |
= на II полугодие 2013 г. |
= Индекс журнала для индивидуальных подписчиков — 71 442, =
| для предприятий и организаций — 71 443 =
Ё в Каталоге агенства «Роспечать». =
111 111 111 111 111 100 455 114 826 424 970 162 737 445 012 477 817 478 274 334 210 928 631 698 913 081 152 949 280 396 775 036 365 931 565 582 249 765 252 759 728 203 815 966 615 475 414 639 209 821 885 169 664

Показать Свернуть
Заполнить форму текущей работой